年3月18日是第22个“全国爱肝日”，今年的宣传主题是“全民参与、主动筛查、规范诊疗、治愈肝炎”。旨在号召大家积极行动起来，进一步普及各种类型肝病特别是慢性病毒性肝炎的防治知识，全民参与，主动筛查，规范诊疗，有效防治肝炎及其并发症。肝病终末期只能通过肝移植进行治疗，但肝移植后长期免疫仍是很大问题，或许肝细胞移植是一个可选择的潜在方向。
儿童急性肝功能衰竭
儿童急性肝功能衰竭是一种罕见但危害极大的疾病。肝移植是目前最有效的治疗方法，但它有较多的局限性，包括器官捐献者的数量稀缺、手术风险以及终生免疫抑制的需要及其相关并发症。此外，进行移植的决定并不总是直截了当的，因为其中一些患者可能有机会自发肝脏恢复。
迄今为止，已经提出了几种预后模型来预测没有LT的死亡，但没有找到最佳预后模型，从而导致一定程度的过度移植。肝细胞移植是一个比较有潜力的选择，因为许多患者只需要短期的肝脏支持，随后他们自己的肝脏就会恢复。但将细胞注射到门静脉系统中存在凝血病患者出血的潜在风险，并且需要长期免疫抑制。克服这些限制的一种方法是将肝细胞封装在海藻酸盐中，海藻酸盐是一种生物惰性材料，可保护肝细胞免受宿主免疫系统的影响，同时允许底物和蛋白质自由通过。然后将嵌入海藻酸盐微珠中的肝细胞注入腹腔。
该技术允许在不使用免疫抑制的情况下进行细胞移植。微囊化肝细胞治疗ALF动物模型的成功已在多项研究中得到证实，但尚未转化为临床实践。该项研究开发出适用于人类的的肝细胞封装技术，并在此报告该技术在8名ALF儿童中的可行性、安全性和首次人体试验的结果。
该项研究于年发表在国际著名肝病学期刊《JournalofHepatology》上，他们在免疫功能正常的健康大鼠中测试了临床级人肝细胞微珠(HMB)和空的微珠。随后，8名正在等待合适的LT同种异体移植的ALF儿童接受了HMB的腹膜内移植（图2）。随后监测了手术的并发症，评估了自发天然肝再生后或LT时回收的HMB的宿主免疫反应和残余功能。结果发现，健康大鼠腹腔移植HMBs是安全的，并保留了合成和解毒功能，无需免疫抑制。随后，8名ALF患儿接受了HMBs（4名新生儿患有血色素沉着病、2名病毒感染和2名在输液时原因不明的儿童），他们的中位年龄为14.5天，年龄范围为1天至6岁。该过程耐受性良好，没有并发症。在8名儿童中，4名避免了LT，而3名在干预后成功过渡到LT。输注后（LT时）回收的HMB在结构上是完整的，没有宿主细胞粘附，并且含有保留功能的活肝细胞。由此可以得出结论，即在ALF儿童中输注HMB是可行且安全的。
01
评估体内微珠的功能和安全性
为了在临床使用之前确定封装的HMB的安全性和功能，他们测试了移植到正常大鼠的腹膜腔中由临床级材料生产的EMB和HMB。发现所有动物都很好地耐受了该过程，没有任何并发症。人血清白蛋白在移植HMBs后的大鼠第1天（32.6±5.8ng/ml）、第3天（10.3±2.9ng/ml）可在外周血中检测到，并在第7天降至较低水平（1.7±0.1ng/ml）。移植后7天，腹腔内的任何结构都没有炎症或微珠粘附的迹象。一些微珠松散地附着在网膜和肠系膜上，但用移植培养基冲洗后很容易脱落。取回的微珠完好无损，无任何畸形。有少量EMB(1%)被贴壁宿主细胞覆盖，而HMB表面完全透明（图2）。02
患者的临床特征和结果
8名患有ALF的儿童（4名男性）都符合列出标准，并且所有儿童在HMB输注时都被列入LT，除了1名儿童具有移植的绝对禁忌症。统计数据见表1。中位年龄为28天（范围：1天至6岁）。6名患者体重不足3.5公斤。4名儿童被诊断患有NH，1名患有播散性HSV1型，1名患有腺病毒相关性肝功能衰竭，2名儿童无法确定病因。入院时的中位INR（范围）为3.2（2.2-4.1），总胆红素为.5（52-umol/L）。中位最大INR和总胆红素分别为5.8(5.2-14.1)和(99-umol/L)。患者1、2和8的ALT显著升高（1,、1,和5,IU/L），而其他患者的ALT轻度升高。在该中心入院后的第3-8天（患者1、2、3、5、6和8）进行了HMB的腹膜内移植。患者4和患者7在入院后第14天接受了第一次微珠输注，在最初的临床改善之后随后又临床恶化之后，分别在第21天和第33天接受了第二次输注。两名患者移植了ABO不相容的肝细胞微珠。且两名患者均小于1岁。移植到微珠中的总细胞数范围为1.5×至3.0×细胞/kg，每次移植的中位数为2.4×细胞/kg（表2）。所有患者都很好地耐受了该过程，没有输注后并发症。三名患者需要连续肾脏替代治疗作为标准ALF管理的一部分。所有NH患者还接受了换血、静脉注射免疫球蛋白(IVIG)、抗氧化鸡尾酒和铁螯合治疗。这些患者均未接受过产前IVIG治疗。总之，在8名患者中，4名自发恢复并避免了对LT的需要（患者1、3、6和8），而3名桥接至LT（患者2、4和7）。7名幸存者的长期结果（长达8年）均良好。2年后发现患者8有NBAS突变，虽从ALF的初始发作中完全恢复，但1年后出现INR为16和脑病。曾计划进行HMB的腹膜内移植，但由于当时实验室的微珠生产技术问题而无法进行，因此进行了LT治疗。03
回收的肝细胞的代谢、形态和功能
3名患者（2、4和7）在LT时取出微珠，分别是在首次输注HMB后的第4天、第14天和第30天。发现大量HMB散布在整个腹膜腔中，主要位于网膜周围，但这些很容易通过冲洗去除。宏观上，腹腔内器官之间没有炎症或粘连的迹象。在光学显微镜下，观察到的HMB保持了其物理完整性。它们的表面光滑，没有宿主免疫细胞，如淋巴细胞（图3）。回收的HMB用FDA/PI染色，在荧光显微镜下呈绿色，表明细胞是有活力的。分别在移植后3个月、6个月通过腹腔镜从患者3、6和8中选择性地取出HMB。3个月时的腹腔镜检查显示HMB在盆腔内以小团块的形式附着。没有证据表明纤维化、粘连或严重的腹膜反应。还通过灌洗回收了一些单个微珠（图4）。患者6输注HMB后6个月的腹腔镜检查显示多个HMB粘附在网膜、左结肠系膜和子宫后面。组织样本含有纤维血管组织，包括一簇微珠，附近有巨细胞反应。值得注意的是，FDA/PI染色试图确定这些回收的HMB的细胞活力，但染色不成功。同样，由于HMB数量不足，无法评估功能。结论
在该研究中，ALF儿童移植HMB的结果非常喜人，所有符合LT条件的患者都存活了下来。4名患者的临床改善达到了从移植名单中除名的程度。三名患者继续进行LT；其中2名婴儿在等待超紧急LT一个月或更长时间后幸存下来。尽管无法在该病例系列中证明疗效，但HMB的潜在有益作用可能使在HMB输注后不久观察到临床和生化指标的改善。
治疗ALF患者所需的总细胞数仍存在争议，并且从未对微囊化肝细胞进行过研究。在临床前研究中，作为支持ALF所需的微囊移植的细胞数量在肝脏总质量的4%到30%之间变化很大。值得一提的是，本研究中使用的封装肝细胞是冷冻保存的肝细胞，解冻后往往功能有限。因此，需要更多的HMB来支持这些患者。然而，应避免将大量HMB注入腹膜腔，因为它可能导致腹内压快速升高和随后的腹腔室综合征。
总之，海藻酸盐微囊化冷冻保存的人肝细胞腹膜内输注是可行和安全的，即使在小婴儿中也是如此。这种方法可以消除肝移植的需要或充当LT的桥梁。
文献来源DhawanA,ChaijitraruchN,FitzpatrickE,BansalS,FilippiC,LehecSC,HeatonND,KaneP,VermaA,HughesRD,MitryRR.Alginatemicroencapsulatedhumanhepatocytesforthetreatmentofacuteliverfailureinchildren.JHepatol.May;72(5):-.doi:10./j.jhep..12..EpubDec13.PMID:31849.预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇
