StemCellresearchTherapy
文献引用ChenL,XiangB,WangX,etal.Exosomesderivedfromhumanmenstrualblood-derivedstemcellsalleviatefulminanthepaticfailure[J].StemCellResearchTherapy,,8(1):9.（IF4.5）
本实验所用产品RayBiotech人AAH-CYT-G抗体玻片芯片（个炎症、趋化、生长、血管生成等细胞因子抗体芯片）
实验样品外泌体
研究背景临床暴发性肝衰竭（FHF）拥有很高的死亡率，同时患者会有非常严重的临床症状，例如凝血障碍，黄疸和多器官衰竭。然而，FHF的唯一治疗方法是肝移植，但受供肝不足的限制。
人月经血源性干细胞（MenSCs）是从月经流体中分离的人类经血祖细胞（MBPC）。MenSCs类似于间充质干细胞（MSC），其具有增殖能力和广泛的多能性，包括分化属于所有三种胚系的细胞类型的能力。MenSCs表现出比骨髓来源的MSC更高的增殖率，并且MenSCs在临床研究中诱导低水平的免疫原性，并且可以扩展至少20代而无遗传异常。
外泌体是具有50-nm直径并由各种细胞类型分泌的双脂质膜囊泡。外泌体携带复杂的蛋白质和RNAs，对细胞和动物生理具有潜在的影响。研究表明，外泌体参与复杂的生理过程，如细胞间通讯，抗原呈递和免疫反应。
水飞蓟素是治疗肝脏疾病的研究很好的药物。已经发现水飞蓟素具有肝保护，抗氧化，抗炎活性。水飞蓟在本研究中作为参考药物，以比较人类经血源性干细胞衍生的外泌体（MenSC-Ex）实现的有益效果。
由于这些优势，作者试图调查MenSC-Ex在D-GalN/LPS诱导的FHF中的治疗潜力。这项研究有两个目的。首先，他们试图研究MenSC-Ex对AML12细胞（体外）和D-GalN/LPS诱导的FHF小鼠（体内）的治疗效果。第二，他们寻求确定基础的MenSC-Ex介导的肝脏凋亡抑制的机制。
实验步骤1外泌体的收集MenSCs培养到70-80%的密度，再额外培养24小时。收集培养上清，g离心20分钟以去除死亡的细胞和细胞碎片。将上清通过0.22μm的滤膜，并通过30KDacutoff的浓缩柱进行浓缩。往浓缩液中加入1/5体积的ExoQuick-TC外泌体沉淀液（SystemBiosciences,Inc.）并孵育过夜。随后用g离心30分钟，吸出上清液，再在g离心5分钟以除去残余的ExoQuick-TC。富集了外泌体的部分用μl的PBS溶解，并储存在-80°C。
2检测MenSC-Ex在体内和体外的分布情况采用Exo-Green对MenSC-Ex进行标记，并与AML12细胞进行共培养，并在荧光显微镜下观察，可以看到所有的AML12细胞都能观察到荧光信号。这一结果说明AML12细胞成功摄入了MenSC-Ex。随后研究人员将经过标记的MenSC-Ex从尾部血管注射入C57/BL6小鼠体内，在3-6个小时候，通过实体成像技术发现，荧光信号出现在小鼠的肝脏，肺部以及脾脏。
3MenSC-Ex增强D-GalN/LPS诱导的FHF小鼠的存活率和改善的肝功能小鼠在注射D-GalN/LPS后6小时开始死亡，这些小鼠的死亡率在12小时内达到80％。然而，用MenSC-Ex预处理的小鼠的死亡率显着降低。
4用抗体芯片检测MenSCs和MenSC-Ex的表达差异研究人员采用RayBiotech人AAH-CYT-G芯片对MenSCs和MenSC-Ex中的蛋白表达进行了检测，发现(ICAM-1),angiopoietin-2,Axl,angiogenin,(IGFBP-6),osteoprotegerin,IL-6和IL-8在MenSC-Ex中表达水平更高。
结论MenSC-Ex含有许多细胞因子，包括ICAM-1，血管生成素-2，Axl，血管生成素，IGFBP-6，骨保护素，IL-6和IL-8。已知IL-6作为促存活因子，其可刺激肝细胞增殖。IL-8是免疫系统的趋化因子，可以将嗜中性粒细胞，内皮细胞和巨噬细胞募集到受损组织的部位。血管生成素-2可以刺激细胞增殖和促进细胞存活，其主要由肝产生并且通常在人体液中循环。因此，在MenSC-Ex中高表达的这一系列细胞因子可能是其具有肝脏保护作用的原因。
RayBiotech作为国际领先的蛋白芯片和免疫产品专业供应商，拥有世界上种类最多的抗体芯片及ELISA及产品，其产品检测灵敏度高，种属多样，包括涵盖人、小鼠、大鼠、猪、马、牛、猴、犬、猫、兔等多个种属。使用RayBio公司产品发表的文献达到数千篇。
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